مصنوعات
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ڊيٽيڪشن کٽ 2019-nCoV لاءِ
متوقع استعمال
هي ڪٽ نئين ڪورونوايرس (2019-nCoV) جي معيار جي سڃاڻپ لاء استعمال ڪيو ويو آهي گلي جي swabs، nasopharyngeal swabs، bronchoalveolar lavage fluid، sputum. هن پراڊڪٽ جو پتو لڳائڻ جو نتيجو صرف ڪلينڪ ريفرنس لاء آهي، ۽ ان کي صرف استعمال نه ڪيو وڃي. ڪلينڪ جي تشخيص ۽ علاج لاء ثبوت. حالت جو هڪ جامع تجزيو مريض جي ڪلينڪ جي ظاهر ۽ ٻين ليبارٽري ٽيسٽ سان گڏ گڏ ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.
چڪاس جي اصول
ڪٽ هڪ-قدم RT-PCR ٽيڪنالاجي تي ٻڌل آهي.حقيقت ۾، 2019 نئون ڪورونوايرس (2019-nCoV) ORF1ab ۽ N جينز کي ايمپليفڪيشن ٽارگيٽ علائقن جي طور تي چونڊيو ويو.مخصوص پرائمر ۽ فلورسنٽ پروبس (N جين پروبس کي FAM سان ليبل ڪيو ويو آهي ۽ ORF1ab پروبس کي HEX سان ليبل ڪيو ويو آهي) نموني ۾ 2019 نئين قسم جي ڪورونا وائرس آر اين اي کي ڳولڻ لاءِ ٺهيل آهن.ڪٽ ۾ پڻ شامل آهي هڪ اندروني ڪنٽرول ڳولڻ وارو نظام (اندروني ڪنٽرول جين پروب سان ليبل ٿيل CY5) نموني گڏ ڪرڻ جي عمل جي نگراني ڪرڻ لاءِ، آر اين اي ۽ پي سي آر ايمپليفڪيشن، ان سان غلط منفي نتيجن کي گهٽائڻ.
مکيه اجزاء
| اجزاء | حجم(48T/ڪٽ) |
| RT-PCR ردعمل حل | 96µl |
| nCOV پرائمر TaqMan Probemixture (ORF1ab، N جين، RnaseP جين) | 864µl |
| ناڪاري ڪنٽرول | 1500µl |
| nCOV مثبت ڪنٽرول (l ORF1ab N جين) | 1500µl |
پنهنجا ريجنٽس: آر اين اي ڪڍڻ يا صاف ڪرڻ وارا ريجنٽس.منفي / مثبت ڪنٽرول: مثبت ڪنٽرول آر اين اي آهي جنهن ۾ ٽارگيٽ ٽڪرا شامل آهن، جڏهن ته منفي ڪنٽرول نيوڪليڪ ايسڊ آزاد پاڻي آهي.استعمال دوران، انهن کي ڪڍڻ ۾ حصو وٺڻ گهرجي ۽ انفڪشن کي سمجهيو وڃي.انهن کي سنڀاليو وڃي ۽ لاڳاپيل ضابطن جي مطابق ختم ڪيو وڃي.
اندروني حوالو جين انساني RnaseP جين آهي.
اسٽوريج حالتون ۽ ختم ٿيڻ جي تاريخ
-20 ± 5 ℃، بار بار منجمد ٿيڻ کان پاسو ڪريو ۽ 5 ڀيرا وڌيڪ ٿڪايو، 6 مهينن لاءِ صحيح.
قابل اطلاق اوزار
FAM / HEX / CY5 ۽ ٻين ملٽي چينل فلورسنٽ پي سي آر اوزار سان.
نموني گهرجن
1. قابل اطلاق نموني جا قسم: گلا جي سوابس، nasopharyngeal swabs، bronchoalveolar lavage fluid، sputum.
2. نمونو گڏ ڪرڻ (Aseptic ٽيڪنڪ)
فرينجيل swab: هڪ ئي وقت ٻن swabs سان ٽونسل ۽ پوسٽريئر فارينجيل وال کي صاف ڪريو، پوءِ swab هيڊ کي ٽيسٽ ٽيوب ۾ وجھو جنهن ۾ نمونن جو حل موجود هجي.
اسپٽم: مريض کي ڳري کنگهه ٿيڻ کان پوءِ، کنگهه ٿيل اسپتم کي هڪ اسڪرو ڪيپ ٽيسٽ ٽيوب ۾ گڏ ڪريو جنهن ۾ نمونن جو حل هجي.bronchoalveolar lavage سيال: طبي ماهرن پاران نموني.3.Storage ۽ نموني جي نقل و حمل
وائرس جي اڪيلائي ۽ آر اين اي جاچ جا نمونا جلد کان جلد آزمايا وڃن.نمونا جيڪي 24 ڪلاڪن اندر ڳولي سگهجن ٿا 4℃ تي ذخيرو ٿي سگهن ٿا؛جن کي 24 جي اندر ڳولي نه ٿو سگهجي
ڪلاڪ -70 ℃ يا ھيٺ رکڻ گھرجي (جيڪڏھن -70 ℃ جي اسٽوريج جي حالت نه آھي، انھن کي ھئڻ گھرجي
عارضي طور تي ذخيرو ٿيل -20 ℃ فرج).نقل و حمل دوران نمونن کي بار بار منجمد ٿيڻ ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪرڻ گهرجي.نمونن کي گڏ ڪرڻ کان پوء جيترو جلدي ممڪن ٿي سگهي ليبارٽري ڏانهن موڪليو وڃي.جيڪڏهن نمونن کي ڊگھي فاصلي تي منتقل ڪرڻ جي ضرورت آهي، خشڪ برف جي اسٽوريج جي سفارش ڪئي وئي آهي.
ٽيسٽ جا طريقا
1 نموني پروسيسنگ ۽ آر اين اي ڪڍڻ (نموني پروسيسنگ ايريا)
آر اين اي ڪڍڻ لاءِ 200μl مائع نموني وٺڻ جي صلاح ڏني وئي آهي.لاڳاپيل نڪتل قدمن لاءِ، تجارتي آر اين اي ڪڍڻ واري ڪِٽس جون هدايتون ڏسو.ٻئي منفي ۽ منفي
هن کٽ ۾ ڪنٽرول ڪڍڻ ۾ ملوث هئا.
2 پي سي آر ريجنٽ تيار ڪرڻ (ريگينٽ تيار ڪرڻ جو علائقو)
2.1 کٽ مان سڀئي اجزاء هٽائي ڇڏيو ۽ ٿڪايو ۽ ڪمري جي حرارت تي ملايو.استعمال ڪرڻ کان پهريان ڪجھ سيڪنڊن لاءِ 8,000 rpm تي سينٽرفيوج؛ريجينٽس جي گهربل مقدار کي ڳڻيو، ۽ رد عمل جو نظام تيار ڪيو ويو آھي جيئن ھيٺ ڏنل جدول ۾ ڏيکاريل آھي:
| اجزاء | اين سرونگ (25µl سسٽم) |
| nCOV پرائمر TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR ردعمل حل | 2 µl × N |
| *N = ٽيسٽ ڪيل نمونن جو تعداد + 1 (منفي ڪنٽرول) + 1 (nCOVمثبت ڪنٽرول) | |
2.2 اجزاء کي چڱيءَ طرح ملائڻ کان پوءِ، ٿوري وقت لاءِ سينٽرفيوج ڪريو ته جيئن ٽيوب جي ڀت تي موجود سمورو مائع ٽيوب جي تري ۾ اچي وڃي، ۽ پوءِ 20 µl ايمپليفڪيشن سسٽم کي PCR ٽيوب ۾ داخل ڪريو.
3 نموني (نموني تيار ڪرڻ جو علائقو)
اضافي کان پوء منفي ۽ مثبت ڪنٽرول جي 5μl شامل ڪريو.نموني جي آر اين اي کي جانچڻ لاء پي سي آر رد عمل ٽيوب ۾ شامل ڪيو ويو آهي.
ٽيوب کي مضبوطيءَ سان ڪيپ ڪريو ۽ سينٽرفيوج کي 8,000 rpm تي ڪجھ سيڪنڊن لاءِ ان کي ايمپليفڪيشن جي سڃاڻپ واري علائقي ۾ منتقل ڪرڻ کان اڳ.
4 پي سي آر ايمپليفڪيشن (تفصيل جو پتو لڳائڻ وارو علائقو)
4.1 رد عمل واري ٽيوب کي آلي جي نموني سيل ۾ رکو، ۽ ھيٺ ڏنل پيرا ميٽر مقرر ڪريو:
| اسٽيج | سائيڪل نمبر | گرمي پد(°C) | وقت | گڏ ڪرڻسائيٽ |
| ريورسنقل | 1 | 42 | 10 منٽ | - |
| اڳوڻو ٺهڻn | 1 | 95 | 1 منٽ | - |
| سائيڪل | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | ڊيٽا گڏ ڪرڻ |
اوزار جي سڃاڻپ چينل جي چونڊ: فلورسنس سگنل لاءِ FAM، HEX، CY5 چينل چونڊيو.ريفرنس فلورسنٽ ڪون لاء، مهرباني ڪري ROX نه چونڊيو.
5 نتيجن جو تجزيو (مهرباني ڪري ترتيب ڏيڻ لاءِ هر اوزار جي تجرباتي هدايتن جو حوالو ڏيو)
ردعمل کان پوء، نتيجن کي بچايو.تجزيي کان پوء، تصوير جي مطابق شروعاتي قيمت، ختم ٿيڻ واري قيمت، ۽ بيس لائين جي حد جي قيمت کي ترتيب ڏيو (استعمال ڪندڙ حقيقي صورتحال جي مطابق ترتيب ڏئي سگھن ٿا، شروعاتي قيمت 3 ~ 15 تائين سيٽ ڪري سگھجي ٿو، ختم ٿيڻ واري قيمت تي سيٽ ڪري سگھجي ٿو. 5~20، ايڊجسٽمينٽ) logarithmic گراف ۾ ونڊو جي حد تي، حد جي لڪير logarithmic مرحلي ۾ آهي، ۽ منفي ڪنٽرول جي amplification وکر هڪ سڌي لڪير آهي يا حد جي هيٺان).
6 Quauty control（Test ۾ هڪ طريقيڪار ڪنٽرول شامل آهي） منفي ڪنٽرول: FAM، HEX، CY5 ڳولڻ واري چينلن لاءِ ڪو به واضح واڌارو وکر ناهي.
COV مثبت ڪنٽرول: FAM ۽ HEX ڳولڻ واري چينلز جو واضح amplification وکر، Ct value≤32، پر CY5 چينل جو ڪو به وڌائڻ وارو وکر نه؛
مٿيون گهرجون پوريون ٿيڻ گهرجن ساڳئي تجربي ۾؛ٻي صورت ۾، تجربو غلط آهي ۽ بار بار ٿيڻ جي ضرورت آهي.
7 نتيجن جو تعين.
7.1 جيڪڏهن امتحان واري نموني جي FAM ۽ HEX چينلن ۾ ڪو به amplification وکر يا Ct value> 40 نه آهي، ۽ CY5 چينل ۾ هڪ ايمپليفڪيشن وکر آهي، اهو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ته ڪو به 2019 نئون ڪورونوايرس (2019-nCoV) ناهي. نموني ۾ آر اين اي؛
.2 جيڪڏهن امتحان واري نموني ۾ FAM ۽ HEX چينلز ۾ واضح واڌ ويجهه وارا وکر آهن، ۽ Ct قدر ≤40 آهي، اهو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ته نمونو 2019 نئين ڪورونوايرس (2019-nCoV) لاء مثبت آهي.
7.3 جيڪڏهن امتحان واري نموني ۾ صرف FAM يا HEX جي هڪ چينل ۾ واضح ايمپليفڪيشن وکر آهي، ۽ Ct قدر ≤40 آهي، ۽ ٻئي چينل ۾ ڪو به واڌارو وکر ناهي، نتيجن کي ٻيهر جانچڻ جي ضرورت آهي.جيڪڏهن ٻيهر امتحان جا نتيجا برابر آهن، نموني کي نئين لاء مثبت ثابت ڪري سگهجي ٿو
ڪورونا وائرس 2019 (2019-nCoV).جيڪڏهن ٻيهر امتحان جو نتيجو منفي آهي، اهو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ته نموني 2019 نئين ڪورونوايرس (2019-nCoV) لاء منفي آهي.
مثبت فيصلي جو قدر
ROC وکر جو طريقو استعمال ڪيو ويندو آهي سيٽ جي حوالن جي CT قيمت کي طئي ڪرڻ لاء ۽ اندروني ڪنٽرول ريفرنس ويليو 40 آهن.
امتحان جي نتيجن جي تشريح
1.هر تجربي کي منفي ۽ مثبت ڪنٽرول لاءِ آزمايو وڃي.ٽيسٽ جا نتيجا صرف طئي ڪري سگھجن ٿا جڏهن ڪنٽرول معيار ڪنٽرول گهرجن کي پورا ڪن
2. جڏهن FAM ۽ HEX ڳولڻ وارا چينل مثبت آهن، CY5 چينل (اندروني ڪنٽرول چينل) مان نتيجو سسٽم جي مقابلي جي ڪري منفي ٿي سگهي ٿو.
3. جڏهن اندروني ڪنٽرول نتيجو منفي آهي، جيڪڏهن ٽيسٽ ٽيوب جي FAM ۽ HEX ڳولڻ وارا چينل پڻ منفي آهن، ان جو مطلب آهي ته سسٽم غير فعال آهي يا آپريشن غلط آهي، ٽي ٽيسٽ غلط آهي.تنهن ڪري، نموني کي ٻيهر جانچڻ جي ضرورت آهي.
