مصنوعات
2019-nCoV لاءِ لائف ڪاسم SARS-Cov-2-RT-PCR ڊيٽيڪشن ڪٽ
متوقع استعمال
هي ڪٽ نئين ڪورونا وائرس (2019-nCoV) جي معيار جي سڃاڻپ لاءِ استعمال ڪئي ويندي آهي جيڪا ڳلي جي سواب، ناسوفرينجيل سواب، برونڪوئليولر ليويج فلوئڊ، اسپتم استعمال ڪندي ڪئي ويندي آهي. هن پراڊڪٽ جو پتو لڳائڻ جو نتيجو صرف ڪلينڪل حوالي لاءِ آهي، ۽ ان کي ڪلينڪل تشخيص ۽ علاج لاءِ واحد ثبوت طور استعمال نه ڪيو وڃي. مريض جي ڪلينڪل ظاهر ۽ ٻين ليبارٽري ٽيسٽن سان گڏ حالت جو هڪ جامع تجزيو ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.
چڪاس جو اصول
هي ڪٽ هڪ قدم RT- PCR ٽيڪنالاجي تي ٻڌل آهي. حقيقت ۾، 2019 جي نئين ڪورونا وائرس (2019-nCoV) ORF1ab ۽ N جين کي ايمپليفڪيشن ٽارگيٽ ريجن طور چونڊيو ويو هو. مخصوص پرائمر ۽ فلوروسينٽ پروبس (N جين پروبس کي FAM سان ليبل ڪيو ويو آهي ۽ ORF1ab پروبس کي HEX سان ليبل ڪيو ويو آهي) نمونن ۾ 2019 جي نئين قسم جي ڪورونا وائرس آر اين اي کي ڳولڻ لاءِ ٺهيل آهن. ڪٽ ۾ هڪ اينڊوجينس اندروني ڪنٽرول ڳولڻ وارو نظام (CY5 سان ليبل ٿيل اندروني ڪنٽرول جين پروب) پڻ شامل آهي ته جيئن نموني گڏ ڪرڻ، RNA ۽ PCR امپليفڪيشن جي عمل جي نگراني ڪري سگهجي، انهي ڪري غلط منفي نتيجن کي گهٽائي سگهجي ٿو.
مکيه جزا
| جزا | جلد(48 ٽي/ڪٽ) |
| آر ٽي-پي سي آر رد عمل جو حل | 96µl |
| nCOV پرائمر TaqMan Probemixture (ORF1ab، N جين، RnaseP جين) | 864µl |
| منفي ڪنٽرول | 1500μl |
| nCOV مثبت ڪنٽرول (l ORF1ab N جين) | 1500μl |
پنهنجا ري ايجنٽ: آر اين اي ڪڍڻ يا صاف ڪرڻ وارا ري ايجنٽ. منفي/مثبت ڪنٽرول: مثبت ڪنٽرول آر اين اي آهي جنهن ۾ ٽارگيٽ ٽڪرو شامل آهي، جڏهن ته منفي ڪنٽرول نيوڪليڪ ايسڊ کان پاڪ پاڻي آهي. استعمال دوران، انهن کي ڪڍڻ ۾ حصو وٺڻ گهرجي ۽ انهن کي متعدي سمجهيو وڃي. انهن کي لاڳاپيل ضابطن جي مطابق هٿ ڪيو وڃي ۽ ضايع ڪيو وڃي.
اندروني حوالو جين انساني RnaseP جين آهي.
اسٽوريج حالتون ۽ ختم ٿيڻ جي تاريخ
-20±5℃، 5 ڀيرا کان وڌيڪ بار بار منجمد ٿيڻ ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو، 6 مهينن لاءِ صحيح.
قابل اطلاق اوزار
FAM / HEX / CY5 ۽ ٻين ملٽي چينل فلوروسينٽ PCR اوزار سان.
نموني جون گهرجون
1. قابل اطلاق نموني جا قسم: ڳلي جا سواب، ناسوفيرينجيل سواب، برونڪوئلويولر ليويج فلوئڊ، اسپتم.
2. نموني گڏ ڪرڻ (جڙيل ٽيڪنڪ)
فارينجيل سواب: هڪ ئي وقت ٻن سواب سان ٽانسلز ۽ پوئين فارينجيل وال کي صاف ڪريو، پوءِ سواب هيڊ کي هڪ ٽيسٽ ٽيوب ۾ ٻوڙيو جنهن ۾ نموني جو محلول هجي.
بلغم: مريض کي ڳري کنگهه ٿيڻ کان پوءِ، کنگهه ٿيل بلغم کي هڪ اسڪرو ڪيپ ٽيسٽ ٽيوب ۾ گڏ ڪريو جنهن ۾ نموني جو حل هجي؛ برونڪوئليوولر ليويج فلوئڊ: طبي ماهرن پاران نموني وٺڻ. 3. نمونن جي اسٽوريج ۽ نقل و حمل.
وائرس آئسوليشن ۽ آر اين اي ٽيسٽنگ لاءِ نمونن کي جلد کان جلد جانچڻ گهرجي. اهي نمونا جيڪي 24 ڪلاڪن اندر ڳولي سگهجن ٿا انهن کي 4 ℃ تي ذخيرو ڪري سگهجي ٿو؛ اهي جيڪي 24 ڪلاڪن اندر ڳولي نه سگهجن ٿا.
ڪلاڪن کي -70 ℃ يا ان کان گهٽ تي ذخيرو ڪرڻ گهرجي (جيڪڏهن -70 ℃ جي اسٽوريج جي حالت نه هجي، ته انهن کي هجڻ گهرجي)
عارضي طور تي -20 ℃ ريفريجريٽر تي ذخيرو ٿيل). نمونن کي نقل و حمل دوران بار بار منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪرڻ گهرجي. نمونن کي گڏ ڪرڻ کان پوءِ جلد کان جلد ليبارٽري ڏانهن موڪليو وڃي. جيڪڏهن نمونن کي ڊگهي فاصلي تي منتقل ڪرڻ جي ضرورت آهي، ته خشڪ برف جي اسٽوريج جي سفارش ڪئي وئي آهي.
ٽيسٽ جا طريقا
1 نموني پروسيسنگ ۽ آر اين اي ڪڍڻ (نموني پروسيسنگ علائقو)
آر اين اي ڪڍڻ لاءِ 200μl مائع نموني وٺڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي. لاڳاپيل ڪڍڻ جي مرحلن لاءِ، ڪمرشل آر اين اي ڪڍڻ ڪٽس جي هدايتن جو حوالو ڏيو. منفي ۽ منفي ٻئي
هن ڪِٽ ۾ ڪنٽرول ڪڍڻ ۾ شامل هئا.
2 پي سي آر ري ايجنٽ تيار ڪرڻ (ري ايجنٽ تيار ڪرڻ وارو علائقو)
2.1 ڪِٽ مان سڀئي جزا ڪڍو ۽ پگھليو ۽ ڪمري جي حرارت تي ملايو. استعمال کان اڳ ڪجھ سيڪنڊن لاءِ 8,000 rpm تي سينٽريفيوج؛ ري ايجنٽس جي گهربل مقدار جو حساب ڪريو، ۽ رد عمل جو نظام تيار ڪيو ويندو جيئن هيٺ ڏنل جدول ۾ ڏيکاريل آهي:
| جزا | نائيروجن سرونگ (25µl سسٽم) |
| nCOV پرائمر TaqMan probemixture | 18 μl × ن |
| آر ٽي-پي سي آر رد عمل جو حل | 2 μl × ن |
| *N = جانچيل نمونن جو تعداد + 1 (منفي ڪنٽرول) + 1 (nCOV)مثبت ڪنٽرول) | |
2.2 اجزاء کي چڱيءَ طرح ملائڻ کان پوءِ، ٿوري وقت لاءِ سينٽريفيوج ڪريو ته جيئن ٽيوب جي ڀت تي موجود سڄو مائع ٽيوب جي تري ۾ پوي، ۽ پوءِ 20 µl ايمپليفڪيشن سسٽم کي پي سي آر ٽيوب ۾ شامل ڪريو.
3 نموني (نموني تيار ڪرڻ جو علائقو)
ڪڍڻ کان پوءِ منفي ۽ مثبت ڪنٽرولن جو 5μl شامل ڪريو. جانچڻ لاءِ نموني جو آر اين اي پي سي آر ري ايڪشن ٽيوب ۾ شامل ڪيو ويندو آهي.
ٽيوب کي مضبوطيءَ سان بند ڪريو ۽ ان کي ايمپليفڪيشن ڊيٽيڪشن ايريا ۾ منتقل ڪرڻ کان اڳ ڪجهه سيڪنڊن لاءِ 8,000 rpm تي سينٽريفيوج ڪريو.
4 پي سي آر ايمپليفڪيشن (ايمپليفائيڊ ڊيٽيڪشن ايريا)
4.1 رد عمل واري ٽيوب کي اوزار جي نموني سيل ۾ رکو، ۽ هيٺ ڏنل پيرا ميٽر مقرر ڪريو:
| اسٽيج | سائيڪل نمبر | گرمي پد(°C) | وقت | گڏ ڪرڻسائيٽ |
| ريورسنقل | 1 | 42 | 10 منٽ | - |
| پري ڊينيچوريشنn | 1 | 95 | 1 منٽ | - |
| سائيڪل | 45 | 95 | 15 ڏهائي | - |
| 60 | 30s | ڊيٽا گڏ ڪرڻ |
اوزار جي ڳولا چينل جي چونڊ: فلوروسينس سگنل لاءِ FAM、HEX、CY5 چينل چونڊيو. فلوروسينٽ NONE جي حوالي لاءِ، مهرباني ڪري ROX نه چونڊيو.
5 نتيجن جو تجزيو (مهرباني ڪري سيٽنگ لاءِ هر اوزار جي تجرباتي هدايتن جو حوالو ڏيو)
رد عمل کان پوءِ، نتيجا محفوظ ڪريو. تجزيي کان پوءِ، تصوير جي مطابق بيس لائين جي شروعاتي قدر، آخري قدر، ۽ حد جي قيمت کي ترتيب ڏيو (استعمال ڪندڙ اصل صورتحال مطابق ترتيب ڏئي سگھي ٿو، شروعاتي قدر 3 ~ 15 تي سيٽ ڪري سگھجي ٿو، آخري قدر 5 ~ 20 تي سيٽ ڪري سگھجي ٿو، ترتيب) لاگارٿمڪ گراف ۾ ونڊو جي حد تي، حد جي لڪير لاگارٿمڪ مرحلي ۾ آهي، ۽ منفي ڪنٽرول جو واڌارو وکر هڪ سڌي لڪير يا حد جي لڪير کان هيٺ آهي).
6 ڪواٽي ڪنٽرول (ٽيسٽ ۾ هڪ طريقيڪار ڪنٽرول شامل آهي) منفي ڪنٽرول: FAM، HEX، CY5 ڳولڻ چينلن لاءِ ڪو به واضح واڌارو وکر ناهي.
COV مثبت ڪنٽرول: FAM ۽ HEX ڳولڻ واري چينلن جو واضح ايمپليفڪيشن وکر، Ct ويليو≤32، پر CY5 چينل جو ڪو ايمپليفڪيشن وکر ناهي؛
مٿي ڏنل گهرجون ساڳئي تجربي ۾ هڪ ئي وقت پوريون ڪرڻ گهرجن؛ ٻي صورت ۾، تجربو غلط آهي ۽ ان کي بار بار ڪرڻ جي ضرورت آهي.
7 نتيجن جو تعين.
7.1 جيڪڏهن ٽيسٽ نموني جي FAM ۽ HEX چينلن ۾ ڪو به ايمپليفڪيشن وکر يا Ct ويليو> 40 نه آهي، ۽ CY5 چينل ۾ هڪ ايمپليفڪيشن وکر آهي، ته اهو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ته نموني ۾ ڪو به 2019 نئون ڪورونا وائرس (2019-nCoV) آر اين اي ناهي؛
.2 جيڪڏهن ٽيسٽ نموني ۾ FAM ۽ HEX چينلز ۾ واضح واڌ ويجهه وارا وکر آهن، ۽ Ct ويليو ≤40 آهي، ته اهو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ته نمونو 2019 جي نئين ڪورونا وائرس (2019-nCoV) لاءِ مثبت آهي.
7.3 جيڪڏهن ٽيسٽ نموني ۾ صرف FAM يا HEX جي هڪ چينل ۾ واضح ايمپليفڪيشن وکر آهي، ۽ Ct ويليو ≤40 آهي، ۽ ٻئي چينل ۾ ڪو ايمپليفڪيشن وکر ناهي، ته نتيجن کي ٻيهر جانچڻ جي ضرورت آهي. جيڪڏهن ٻيهر ٽيسٽ جا نتيجا هڪجهڙا آهن، ته نموني کي نئين لاءِ مثبت قرار ڏئي سگهجي ٿو.
ڪورونا وائرس 2019 (2019-nCoV). جيڪڏهن ٻيهر ٽيسٽ جو نتيجو منفي آهي، ته اهو اندازو لڳائي سگهجي ٿو ته نمونو 2019 جي نئين ڪورونا وائرس (2019-nCoV) لاءِ منفي آهي.
مثبت فيصلي جي قيمت
آر او سي وکر جو طريقو ڪٽ جي ريفرنس سي ٽي ويليو کي طئي ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي ۽ اندروني ڪنٽرول ريفرنس ويليو 40 آهي.
ٽيسٽ جي نتيجن جي تشريح
1. هر تجربي کي منفي ۽ مثبت ڪنٽرول لاءِ جانچيو وڃي. ٽيسٽ جا نتيجا صرف تڏهن طئي ڪري سگهجن ٿا جڏهن ڪنٽرول معيار جي ڪنٽرول جي گهرجن کي پورا ڪن.
2. جڏهن FAM ۽ HEX ڳولڻ وارا چينل مثبت هوندا آهن، ته CY5 چينل (اندروني ڪنٽرول چينل) جو نتيجو سسٽم مقابلي جي ڪري منفي ٿي سگهي ٿو.
3. جڏهن اندروني ڪنٽرول جو نتيجو منفي آهي، جيڪڏهن ٽيسٽ ٽيوب جا FAM ۽ HEX ڳولڻ وارا چينل پڻ منفي آهن، ته ان جو مطلب آهي ته سسٽم غير فعال آهي يا آپريشن غلط آهي، ٽيسٽ غلط آهي. تنهن ڪري، نمونن کي ٻيهر جانچڻ جي ضرورت آهي.
